目的 前期研究中，项目组从达摩凤蝶细胞系RIRI-PaDe-2中分离培养出单细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6，通过感染野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）发现克隆株RIRI-PaDe-2-C6对病毒敏感性高于原细胞系RIRI-PaDe-2。本研究将对达摩凤蝶单细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6的生物学特性和外源蛋白表达特性进行研究，并与原细胞系RIRI-PaDe-2进行比较，评价其用于外源蛋白表达的可行性。 方法 使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建重组β-半乳糖苷酶杆状病毒（AcMNPV-Gal）和重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒（AcMNPV-SEAP），分别侵染RIRI-PaDe-2和RIRI-PaDe-2-C6。在感染后的24、48、72、96、120、144、168 h检测2种重组蛋白的表达量，并对2个细胞系的形态学、生长曲线、倍增时间及核型进行分析和比较。 结果 表明：RIRI-PaDe-2和RIRI-PaDe-2-C6均可表达β-半乳糖苷酶（β-Gal）和分泌型碱性磷酸酶（SEAP），单细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6对重组β-Gal的表达水平显著高于原细胞系RIRI-PaDe-2（P < 0.05），在接种AcMNPV-Gal后96 h表达量达到最高。RIRI-PaDe-2-C6对重组SEAP的表达水平与RIRI-PaDe-2无显著差异（P>0.05）。显微观察发现，RIRI-PaDe-2-C6的细胞类型全部为梭形，比原细胞系RIRI-PaDe-2的细胞组成更加单一。RIRI-PaDe-2-C6的群体倍增时间为94.94 h，比原细胞系RIRI-PaDe-2的倍增时间（67.42 h）长。核型分析显示，RIRI-PaDe-2-C6的染色体数量呈正态分布，数目为21~82条，与RIRI-PaDe-2的染色体数目分布范围（48~97条）存在显著差异（P < 0.05）。 结论 通过单细胞克隆方法获得的克隆株RIRI-PaDe-2-C6无论在外源蛋白表达以及基础生物学特性方面均有别于原细胞系RIRI-PaDe-2。

采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对5个双翅目昆虫细胞系进行了染色体分析。结果显示: C6 /36染色体众数为6,为二倍体细胞系; SL2染色体众数为8～12,超二倍体细胞系; L-2 /M delta 2-3染色体众数为8～20,超二倍体细胞系; Aedes albopictus Skuse染色体众数为6,为二倍体细胞系;NIH-SaPe-4染色体众数为10条,为二倍体或亚二倍体细胞系。与来源细胞相比,以上5种细胞染色体数目没有发生根本性的改变。

采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对7种鳞翅目昆虫细胞系进行了染色体分析,得出了各种细胞系染色体分析所需要的秋水仙素浓度与处理时间以及低渗浓度和处理时间的范围; 7种鳞翅目细胞系染色体均表现出典型的鳞翅目昆虫传代细胞的核型特征:染色体数目众多,异倍化严重,多为弥散型的着丝粒的短杆状、颗粒状、点状或圆球状。

对2种双翅目昆虫细胞系(黑腹果蝇胚细胞系SL2以及麻蝇胚细胞系NIH-SaPe-4)38个月长期液氮深低温保存效果进行了研究,通过对冻存时间和保护剂对2种细胞系冻后活力、圆度以及恢复时间影响的测定,比较了3种不同配方冻存保护液的效果。结果表明:2种昆虫细胞系冻后活性均随着冻存时间的增长而逐渐降低。长期冻存期中,使用90%胎牛血清(FBS)+10%二甲基亚砜(DMSO)冻存SL2效果较好,NIH-SaPe-4使用10%DMSO即可满足冻存的需要,而无需额外添加高浓度FBS。甘油不适用于这2种昆虫细胞系的长期

采用RACE和RT-PCR对白蜡虫雌成虫β1-微管蛋白基因进行了克隆,获得的cDNA全长序列为1 492 bp,完整开放阅读框为1 341 bp,编码447个氨基酸残基,包含β微管蛋白的保守区域和GTP结合位点,理论分子量约为50.20 Kda,等电点为4.75。同源性分析表明:所获得的β1-微管蛋白与其它昆虫的β微管蛋白基因在氨基酸水平上是高度同源的,该基因cDNA序列已经递交到Genbank,获得的登录号为JF731244。

针对目前昆虫细胞库日常维护工作中在数据和资料管理上的不足,使用Microsoft Visual Basic 2005 软件开发工具与Microsoft SQL Server 2005数据库管理系统等工具构建了一套昆虫细胞库管理系统。本系统的主要任务是实现各种实验数据的集中管理,并为使用者提供实用的工具,方便这些数据的采集和处理。其主要功能有:细胞系基本信息的管理、照片管理、文献管理、核型分析、细胞冻存与复苏操作、生长曲线绘制等,具有功能全面、操作简便、直观,实用等特点。采用数据库管理系统大大提高了细胞库的管理水平,为昆虫细胞系库的长期有效管理奠定基础。

采用来源于3个目14种昆虫的离体细胞系对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcNPV (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)和家蚕核型多角体病毒BmNPV (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus)进行敏感性测定。试验结果表明:各昆虫细胞系对两种病毒的敏感性不同,来源于双翅目及直翅目的细胞系均不能被这两种病毒感染;AcNPV可侵染来源于鳞翅目的Sf21、Sf9、HighFive、RIRI-PX及HZ,宿主范围较广;而BmNPV仅能侵染BmN细胞,宿主专一。AcNPV对Sf9细胞的感染率最高,接种病毒10 d后感染率平均达84.0%,而RIRI-PX的AcNPV病毒产量最高,形成的多角体数目为43.9PIBs/感染细胞。接种BmNPV10 d后,BmN的感染率为72.2%,形成的多角体数目为23.1.PIBs/感染细胞。

目的 明确白蜡及白蜡高级烷醇吐温水溶液对人真皮乳头细胞(HFDPCs)生长的影响。 方法 采用台盼蓝法测定细胞的的接种数量，接种第2天给药，给药48 h后采用MTS法研究不同浓度吐温80、白蜡及白蜡高级烷醇吐温水溶液对人真皮乳头细胞的作用。 结果 人真皮乳头细胞在吐温80用量1.56~6.25 μg·mL^-1范围内能正常生长。在安全范围内，白蜡(增溶量为0.31~1.25 μg·mL^-1)吐温水溶液、白蜡高级烷醇(增溶量为3.12~12.5 μg·mL^-1)吐温水溶液均能促进人真皮乳头细胞的增殖，其中, 水溶液中含有6.25 μg·mL^-1吐温80和1.25 μg·mL^-1白蜡、水溶液中含有6.25 μg·mL^-1吐温80和12.5 μg·mL^-1白蜡高级烷醇时细胞的增殖率明显高于非那雄胺。 结论 吐温80作为增溶剂，其用量低于6.25 μg·mL^-1时对人真皮乳头细胞安全。在保证吐温80对细胞安全的条件下，白蜡及白蜡高级烷醇可显著促进人真皮乳头细胞的增殖。